Piscina e sala
A sala de testes
Uma sala calma e previsível gera animais calmos e interpretáveis.
Os animais percebem mais coisas na sala de testes do que nós: o zumbido de uma geladeira, um cheiro do animal anterior, uma mudança no lugar onde o experimentador fica. Estas perguntas tratam da sala em si e das pequenas rotinas que a mantêm igual dia após dia.
Perguntas frequentes
Como devo preparar a sala de testes?
Use uma sala silenciosa reservada só para testes, com o labirinto no meio e muitas pistas fixas nas paredes. 1) Mantenha o PC de rastreamento e o experimentador fora da vista do animal, atrás de uma cortina ou biombo. 2) Mantenha tudo no mesmo lugar durante todo o estudo. 3) Mantenha a sala em temperatura estável (geralmente 20-24 °C). O comitê de ética local, as condições da sua licença e o veterinário sempre têm precedência.
Mais detalhes
Os animais se orientam pelas pistas da sala, então qualquer coisa que se mova entre ensaios (pessoas, bolsas, carrinhos) pode virar uma pista enganosa. Esconda o experimentador com cortinas ou divisórias [Bromley-Brits 2011]; mantenha o PC fora da vista da piscina [HVS]. Cortinas em trilhos no teto permitem esconder a sala nos ensaios com pista [Vorhees & Williams 2024]. Confira os acessos antes de encomendar uma piscina grande [HVS].
Para se aprofundar
Morris mostrou que cercar a piscina com cortinas derrubava o desempenho ao nível do acaso, confirmando que as pistas distais da sala impulsionam a aprendizagem de lugar [Morris 1984]. Relate a montagem no item 9 do ARRIVE [Percie du Sert 2020].
Como preparo a sala, a piscina e a plataforma para o labirinto aquático?
Câmera sobre o centro da piscina, piscina quase preenchendo a imagem, pistas distais longe, iluminação difusa. 1) Piscina de cerca de 1,8-2 m de diâmetro com 30 cm de parede acima de cerca de 30 cm de água. 2) Plataforma logo abaixo da superfície, com topo de 1/50 a 1/100 da área da água. 3) Quatro luzes voltadas para o teto, baixas o bastante para não serem vistas da água. 4) PC de rastreamento fora da vista da piscina.
Mais detalhes
O ideal é uma sala quadrada ou cercada por biombos; salas maiores ajudam com pistas distais. Suporte da piscina numa altura confortável com rodízios com trava (uma piscina cheia pode passar de 1,5 t, e o movimento altera a calibração); piscina realmente circular com interior uniforme (preto ou branco para contraste). Coloque os sujeitos com delicadeza de frente para a parede e comece o ensaio quando entrarem. A HVS aconselha água cerca de 13 °C abaixo da temperatura corporal. Camundongos costumam usar plataforma de 10 cm numa piscina menor; numa piscina grande use plataforma maior (por ex., cerca de 20 cm). Piscinas pequenas podem ser mais rasas. Confira os acessos para piscinas grandes.
Para se aprofundar
Tamanho da piscina e da plataforma e temperatura da água dependem da espécie e do protocolo, então pergunte à HVS se tiver dúvida. Suportes de câmera de mais de 1 m ou lentes grande-angulares servem para tetos baixos.
A que ruídos devo ficar atento na sala de testes?
Mantenha a sala silenciosa e evite ruídos súbitos. Roedores ouvem ultrassom que nós não ouvimos, então conserte torneiras pingando, deixe carrinhos que rangem fora durante os ensaios e afaste os monitores do aparato. Reduza ao mínimo a circulação de pessoas. O comitê de ética local, as condições da sua licença e o veterinário sempre têm precedência.
Mais detalhes
A orientação do Reino Unido lista torneiras pingando, rodas de carrinhos e monitores de computador como fontes de ultrassom (acima de 20 kHz), e alerta contra ruídos súbitos e irregulares [Home Office]. Melhor controle ambiental reduz a variabilidade, o que pode reduzir o número de animais necessários [Home Office].
Para se aprofundar
Um detector de ultrassom ajuda a achar fontes escondidas. Um ruído num lado da sala também pode virar pista direcional, então mantenha as fontes de som iguais em todos os lados da sala e de um dia para outro.
Quanto tempo os animais devem se acomodar na sala de testes antes de um ensaio?
Leve os animais à sala de testes nas gaiolas de origem e deixe que se acalmem antes de começar: pelo menos 30 minutos nos protocolos publicados. O veterinário ou uma pessoa competente define o período de aclimatação após a chegada ao biotério. O comitê de ética local, as condições da sua licença e o veterinário sempre têm precedência.
Mais detalhes
Protocolos de labirinto aquático e campo aberto usam pelo menos 30 minutos de aclimatação à sala [Bromley-Brits 2011; Seibenhener & Wooten 2015]. A aclimatação após o transporte é definida por regras nacionais ou por uma pessoa competente [Home Office]. O ARRIVE pede que se relate a aclimatação [Percie du Sert 2020].
Para se aprofundar
Mantenha o tempo de acomodação igual para cada animal e cada dia, e registre. Não achamos fonte sobre o melhor horário do dia: seja consistente e relate.
Com o que devo limpar o labirinto ou a arena entre os animais?
Limpe entre os animais para remover urina, fezes e trilhas de cheiro, e deixe a superfície secar totalmente antes do próximo animal. O etanol é comum; alguns laboratórios usam água hipoclorosa porque deixa menos cheiro. Use o mesmo produto durante todo o estudo. O comitê de ética local, as condições da sua licença e o veterinário sempre têm precedência.
Mais detalhes
Os protocolos variam: etanol 95% para campo aberto [Seibenhener & Wooten 2015], etanol 10-75% em mesas de Barnes [Gawel 2019], ou água hipoclorosa [Komada 2008]. O vapor de etanol pode afetar o comportamento, então ventile e deixe evaporar [Gawel 2019]. No labirinto aquático, retire as fezes e troque a água regularmente [Vorhees & Williams 2024].
Para se aprofundar
Prática variada: nenhum produto é o melhor para todos os testes. Girar a mesa de Barnes além de limpá-la impede que trilhas de cheiro sejam usadas como pistas [Gawel 2019]. Consulte sua equipe de segurança sobre solventes inflamáveis.
Que condições do laboratório devo registrar e relatar?
Registre e relate todas as condições que possam afetar o comportamento: temperatura da sala e da água, nível de luz (lux) e tipo de fonte de luz, horário, quem testou os animais e qualquer ocorrência incomum. Tudo isso vai nos métodos. O comitê de ética local, as condições da sua licença e o veterinário sempre têm precedência.
Mais detalhes
O ARRIVE 2.0 pede quando, onde e com que frequência os procedimentos foram feitos, aclimatação, randomização, cegamento e desfechos humanitários [Percie du Sert 2020]. Registre a temperatura da água diariamente [Vorhees & Williams 2024]. Relate o tipo de fonte de luz além dos lux, pois o lux é ponderado pela visão humana [Peirson 2018].
Para se aprofundar
A randomização é relatada em apenas cerca de 30-40% dos artigos e o cegamento em cerca de 20% [Percie du Sert 2020], então relatá-los com clareza fortalece seu trabalho.
Como a equipe pode enxergar para trabalhar sem perturbar os animais ou o rastreamento?
Use uma luminária de mesa com cúpula no PC atrás do biombo, voltada para longe do labirinto, e evite mudanças bruscas no nível de luz. O comitê de ética local, as condições da sua licença e o veterinário sempre têm precedência.
Mais detalhes
Use luz de trabalho fraca e indireta, posicionada para não iluminar a piscina nem aparecer na imagem da câmera. A iluminação deve ser suficiente e sem ofuscamento, evitando grandes diferenças de iluminância [HSE HSG38; HSE lighting]. Uma lâmpada com dimmer permite definir a luz mínima necessária.
Para se aprofundar
Prática sugerida por nós: confira se a lâmpada não aparece na imagem da câmera.
Para toda a montagem num só lugar, veja o equipamento para o labirinto aquático de Morris (MWM).
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