Piscina e sala

Pistas da sala: onde colocá-las e o que evitar

Seu animal está lendo a sala. Garanta que ele leia o que você quis dizer.

Um rato no labirinto aquático é um pequeno navegador, tirando referências de tudo o que vê. As notas originais pediam "pelo menos 3 pistas diferentes, por ex. 3 pôsteres diferentes (para que ele possa 'triangular'), sempre visíveis de dentro da piscina", colocadas bem fora da piscina. Essa é a parte fácil. O difícil são as pistas que você nunca quis dar: a câmera, uma lâmpada, uma porta que abre, ou você, de pé sempre no mesmo lugar.

Se as pistas estiverem perto da borda da piscina, o rato pode estar associando a pista à plataforma em vez de mapear a sala.

Perguntas frequentes

Onde devo colocar as pistas distais, e por quê?

Coloque várias pistas grandes e distintas nas paredes ao redor do labirinto, altas o bastante para serem vistas por cima da parede da piscina, e nunca as mova durante um estudo. Os animais as usam para deduzir onde está a plataforma ou o buraco de fuga. Faça o conjunto de pistas assimétrico para que nenhuma direção pareça igual a outra. O comitê de ética local, as condições da sua licença e o veterinário sempre têm precedência.

Mais detalhes

As pistas da sala dão sobretudo direção, enquanto o aparato dá distância [Hamilton 2007]. Use muitas pistas fixas [Vorhees & Williams 2006] bem visíveis nas paredes [Vorhees & Williams 2024]. No labirinto de Barnes, as pistas ficam a 50-200 cm e não diretamente sobre o buraco de fuga [Gawel 2019]. A HVS sugere pistas a cerca de duas vezes o diâmetro da piscina a partir do centro, cada uma ocupando cerca de 5° [HVS].

Para se aprofundar

A regra de 2 vezes o diâmetro e 5° é prática da HVS, não um padrão testado. A assimetria é dedução nossa a partir da necessidade de pistas distintivas.

Fontes: doi:10.1037/0097-7403.33.2.100; Vorhees & Williams (2006). Morris water maze: procedures for assessing spatial and related forms of learning and memory. Nature Protocols 1(2):848-858. doi:10.1038/nprot.2006.116; doi:10.1016/j.crtox.2024.100151; Gawel et al. (2019). Assessment of spatial learning and memory in the Barnes maze task in rodents, methodological consideration. Naunyn-Schmiedeberg's Archives of Pharmacology 392(1):1-18. doi:10.1007/s00210-018-1589-y; What is Morris Water Maze (MWM)?

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Que tamanho e cor as pistas devem ter?

Use formas grandes, marcantes e de alto contraste (preto e branco funciona melhor). Roedores enxergam mal os detalhes e não veem o vermelho, então diferenças de cor que você nota podem não ajudá-los. O comitê de ética local, as condições da sua licença e o veterinário sempre têm precedência.

Mais detalhes

A acuidade é de cerca de 0,5 ciclo/grau em camundongos C57BL/6, de cerca de 1 em ratos pigmentados [Prusky 2000] e de cerca de 0,5 em ratos albinos [Prusky 2002]. Roedores são dicromatas, com cones UV e de comprimento de onda médio e sem cone vermelho [Peirson 2018; Jacobs 2001].

Para se aprofundar

Ilustrativo: a 0,5 ciclo/grau, o par de listras mais fino que se distingue ocupa 2°, cerca de 7 cm a 2 m. Faça os elementos bem maiores que isso.

Fontes: doi:10.1016/s0042-6989(00)00081-x; doi:10.1016/s0166-4328(02)00126-2; doi:10.1016/j.jneumeth.2017.04.007; doi:10.1242/jeb.204.14.2439

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Que pistas não controladas meus animais podem estar usando?

Seus animais podem usar qualquer coisa estável que consigam ver, ouvir ou cheirar, como portas, prateleiras, luzes, a câmera, cortinas, aquecedores, gaiolas, o experimentador e até uma saída de ar barulhenta. Tudo bem, desde que nunca se movam. Percorra a sala na altura dos olhos do animal e faça uma lista. O comitê de ética local, as condições da sua licença e o veterinário sempre têm precedência.

Mais detalhes

Objetos da sala funcionam como pistas [Gawel 2019]; muitas pistas que nunca se movem [Vorhees & Williams 2006]. Em labirintos secos usam-se pistas olfativas, e não deve haver fontes de odor (como lixeiras) na sala [Gawel 2019]. Fontes de ruído também importam [Home Office].

Para se aprofundar

A lista de verificação percorrendo a sala e os pontos sobre corrente de ar e som como pista são prática sugerida por nós, não resultados testados.

Fontes: Gawel et al. (2019). Assessment of spatial learning and memory in the Barnes maze task in rodents, methodological consideration. Naunyn-Schmiedeberg's Archives of Pharmacology 392(1):1-18. doi:10.1007/s00210-018-1589-y; Vorhees & Williams (2006). Morris water maze: procedures for assessing spatial and related forms of learning and memory. Nature Protocols 1(2):848-858. doi:10.1038/nprot.2006.116; gov.uk/government/publications/care-and-accommodation-of-animals-in-science-advisory-standards

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Como planejo o experimento para não criar pistas acidentais?

Pistas acidentais são evitadas mantendo tudo igual em cada ensaio, exceto as pistas previstas. 1) Use posições de partida pseudoaleatórias e equilibradas. 2) Fique no mesmo lugar em cada ensaio, escondido se possível, com roupa neutra. 3) Mantenha a sala exatamente igual todos os dias. 4) Use o mesmo produto de limpeza. 5) Randomize e cegue quando puder. O comitê de ética local, as condições da sua licença e o veterinário sempre têm precedência.

Mais detalhes

Use duas partidas cardeais e duas ordinais para que as distâncias da partida à plataforma sejam parecidas, com duas partidas em que a plataforma fica à esquerda e duas à direita; use uma partida não usada para a sonda [Vorhees & Williams 2024]. Um experimentador visível deve usar algo neutro [Gawel 2019]. O sexo e o odor do experimentador podem afetar os roedores [Sorge 2014]. Relate randomização e cegamento [Percie du Sert 2020].

Para se aprofundar

Confira a plataforma: sem sombra, ondulação ou borda visível do ponto de vista do animal (verificação sugerida por nós; nossas fontes não tratam de sombras).

Fontes: doi:10.1016/j.crtox.2024.100151; Gawel et al. (2019). Assessment of spatial learning and memory in the Barnes maze task in rodents, methodological consideration. Naunyn-Schmiedeberg's Archives of Pharmacology 392(1):1-18. doi:10.1007/s00210-018-1589-y; doi:10.1038/nmeth.2935; doi:10.1371/journal.pbio.3000410

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Deve haver marcas ou pistas dentro da piscina?

Normalmente não. Limpe marcas na parede interna acima da água antes de cada sessão, a menos que esteja testando pistas proximais de propósito. O comitê de ética local, as condições da sua licença e o veterinário sempre têm precedência.

Mais detalhes

Pistas proximais mudam o tipo de memória testada [HVS]. A prática varia: um protocolo permite pistas no interior da piscina acima da água [Bromley-Brits 2011]. No labirinto de Barnes, uma parede dentro do labirinto favoreceu uma estratégia serial (não espacial) [Gawel 2019].

Para se aprofundar

Decida, mantenha constante e relate. Uma emenda ou um arranhão podem funcionar como pista proximal: use um interior sem emendas [Vorhees & Williams 2024].

Fontes: What is Morris Water Maze (MWM)?; Bromley-Brits et al. (2011). Morris Water Maze Test for Learning and Memory Deficits in Alzheimer's Disease Model Mice. Journal of Visualized Experiments (53). doi:10.3791/2920; Gawel et al. (2019). Assessment of spatial learning and memory in the Barnes maze task in rodents, methodological consideration. Naunyn-Schmiedeberg's Archives of Pharmacology 392(1):1-18. doi:10.1007/s00210-018-1589-y; doi:10.1016/j.crtox.2024.100151

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A câmera de rastreamento ou as luzes podem virar uma pista?

Sim, se mudarem. Mantenha a câmera, o PC e as luzes no mesmo lugar e estado em todos os ensaios, e cubra qualquer LED indicador que o animal possa ver. O comitê de ética local, as condições da sua licença e o veterinário sempre têm precedência.

Mais detalhes

Usa-se infravermelho de 940 nm porque os animais não o veem e a câmera sim [Vorhees & Williams 2024]; mantenha o PC fora de vista [HVS].

Para se aprofundar

O ponto sobre os LEDs é uma dedução, não um resultado publicado.

Fontes: doi:10.1016/j.crtox.2024.100151

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Onde devo colocar as pistas?

Para aprendizagem espacial, coloque pistas grandes e tridimensionais longe da piscina, nas paredes da sala ou em estruturas fixas, visíveis para os animais. 1) Evite pistas na parede da piscina ou dentro dela. 2) Mantenha a disposição constante dentro de um estudo. 3) Mover pistas não afeta o rastreamento, a menos que causem reflexos.

Mais detalhes

Coloque pistas grandes e distintas nas paredes da sala ao redor da piscina (pistas distais), mantenha-as fixas durante todo o estudo e não ponha pistas na própria piscina. Pistas distais fora do labirinto se aproximam do infinito óptico e favorecem a navegação alocêntrica dependente do hipocampo. Pistas na parede da piscina funcionam como referências locais, que podem compensar déficits e alterar a velocidade de aprendizagem, os déficits e a comparabilidade. Retire pistas coladas dentro da piscina. Inclua uma comparação se mudar a disposição das pistas.

Para se aprofundar

Em RV, as pistas distais podem ficar perto da piscina ou ser grandes e distantes; pistas proximais podem ser movidas em ensaios de estratégia forçada.

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Que cores ratos e camundongos enxergam?

Ratos e camundongos têm visão de duas cores: veem ultravioleta e verde-azul, mas não vermelho. Não têm cone vermelho, então o vermelho lhes parece fraco, e enxergam um UV que nós não vemos. O comitê de ética local, as condições da sua licença e o veterinário sempre têm precedência.

Mais detalhes

Ratos e camundongos são dicromatas: têm cones ultravioleta e de comprimento de onda médio (verde), mas não cone vermelho, e sua visão é dominada pelos bastonetes. Bastonete do camundongo cerca de 498 nm, cone M cerca de 508 nm, cone UV cerca de 360 nm; 97% bastonetes [Peirson 2018]. Ratos têm cones UV e M e visão de cores dicromática [Jacobs 2001]. Camundongos são cerca de 12 vezes menos sensíveis que humanos a 600 nm [Peirson 2018].

Para se aprofundar

O lux ignora o UV e é ponderado para humanos, então lâmpadas com emissão UV podem parecer mais brilhantes para roedores do que seu medidor mostra [Peirson 2018].

Fontes: doi:10.1016/j.jneumeth.2017.04.007; doi:10.1242/jeb.204.14.2439; doi:10.1016/j.visres.2004.01.016

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Devo usar pistas coloridas?

Use formas em preto e branco ou de alto contraste. Vermelho e verde de brilho parecido podem parecer iguais para roedores. O comitê de ética local, as condições da sua licença e o veterinário sempre têm precedência.

Mais detalhes

Use pistas que difiram em brilho, tamanho e forma, e não em cor, porque roedores enxergam mal as cores e quase nada do vermelho. Roedores não têm cone vermelho [Peirson 2018; Jacobs 2001] e têm baixa acuidade [Prusky 2000].

Para se aprofundar

Não achamos teste em labirinto sobre confusão entre pistas vermelhas e verdes; isso decorre dos dados de fotorreceptores.

Fontes: doi:10.1016/j.jneumeth.2017.04.007; doi:10.1242/jeb.204.14.2439; doi:10.1016/s0042-6989(00)00081-x

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