Testes de sonda

Interpretando resultados de sonda e de treino

Alguns "resultados" são na verdade problemas de montagem disfarçados.

Ler resultados de sonda é em parte ciência, em parte trabalho de detetive. Estes guias mostram como é um grupo controle típico, como um déficit pode aparecer e quais problemas de montagem podem se passar por resultado.

Lendo resultados do labirinto aquático

Procure aprendizagem ao longo dos dias, uma busca clara do lugar certo nas sondas e uma montagem organizada. Leia a latência junto com a razão de trajeto, a direção e as medidas de Gallagher, e não isoladamente.

Padrão típico dos controles
Durante a aprendizagem, os ângulos de direção caem para perto de zero e sujeitos bem treinados têm razão de trajeto próxima de 1. Nos testes de sonda, a preferência pelo quadrante-alvo seja qual for o ponto de partida indica memória espacial (quando as plataformas ficam no centro dos quadrantes), e sujeitos treinados entram menos nos quadrantes, concentrando-se no alvo. Ficar junto à parede no início costuma ser adaptação, e o encadeamento é comum no começo da aprendizagem.
Sinais de déficit
Encadeamento numa sonda após o treino completo sugere que a aprendizagem espacial está prejudicada ou ausente, ou que faltam pistas espaciais; o tempo no quadrante-alvo fica então perto do acaso. Tigmotaxia persistente pode refletir estresse ou ansiedade, não ter entendido a tarefa, déficit sensório-motor ou pouca motivação. Um valor Gallagher Global maior significa que o sujeito procurou mais longe do alvo, e essa medida de proximidade mostrou-se muito sensível ao déficit ligado à idade (Gallagher et al., 1993).
Sinais de memória forte
O conteúdo de ajuda descreve sinais de memória forte em vez de um padrão 'aprimorado': ângulos de direção perto de zero em todo um grupo nas sondas indicam memória forte, e a direção costuma ser mais sensível que cruzamentos ou tempo no quadrante do ensaio inteiro, a menos que se use uma primeira fatia. Cuidado com cruzamentos do ensaio inteiro, que favorecem sujeitos que voltam sempre (perseveram) em vez dos flexíveis que verificam e seguem.

Problemas de montagem que parecem resultados

  • Plataforma desenhada na posição espelhada: as bordas da piscina foram clicadas na ordem errada; recalibre norte (em cima), sul (embaixo), oeste (esquerda), leste (direita).
  • O trajeto salta para a plataforma ou sua mão no início: o rastreador varre a partir do canto superior esquerdo e se fixa no primeiro objeto escuro que encontra; trabalhe pelo lado sul.
  • Linhas retas nos traçados ou cronômetro congelado: geralmente programas em segundo plano ou iluminação irregular.
  • O trajeto termina logo antes da plataforma: confira primeiro os diâmetros calibrados da piscina e da plataforma.
  • As velocidades de nado parecem altas demais: um diâmetro de piscina maior que a superfície real da água infla todas as distâncias e velocidades.
  • Ensaios de cerca de 0,1 s: um mouse ou controle remoto que dá clique duplo; troque ou recarregue.
Mais detalhes

Uma plataforma que não sobe permite estratégias não espaciais, então a queda das latências pode ser mal interpretada como aprendizagem espacial. O tempo no quadrante do ensaio inteiro pode enganar, então use a velocidade média como controle e fatias de tempo. Muita inatividade pode alongar a latência de fuga e reduzir os cruzamentos na sonda, então leia junto com as outras medidas. Ensaios com pista determinam se há fatores de desempenho alheios à aprendizagem de lugar (Vorhees e Williams, 2006).

A estratégia importa tanto quanto a precisão: antes da lesão cerebral, camundongos PDAPP usavam menos estratégias espaciais e mais estratégias sistemáticas não espaciais e de voltas repetitivas que os camundongos selvagens (Brody e Holtzman, 2006). Maei et al. (2009) viram que a medida de proximidade superou consistentemente as de quadrante, zona e cruzamentos na capacidade de detectar diferenças entre grupos em sondas com camundongos.

Lendo resultados do labirinto de Barnes

Veja os erros (espiadas) por buraco, a latência e o trajeto até o buraco-alvo e o comprimento do trajeto primário, e confira se os trajetos estão limpos antes de interpretar.

Padrão típico dos controles
Ainda não há padrão publicado confirmado para este teste, então compare com seu próprio grupo controle. O HVS Image informa as aproximações a buracos contadas automaticamente, as espiadas (erros) por buraco, a latência e o trajeto até o buraco-alvo e o comprimento do trajeto primário (o percurso da partida até a primeira aproximação do buraco de fuga).
Sinais de déficit
No estudo original da plataforma, os ratos senescentes mostraram pior memória do local recompensado (Barnes, 1979).
Sinais de memória forte
Ainda não há padrão publicado confirmado para este teste, então compare com seu próprio grupo controle.

Problemas de montagem que parecem resultados

  • O trajeto salta no início: uma sombra passageira (sua mão ou o recipiente de partida) atrai o rastreador; use um béquer de vidro pequeno, luva e manga brancas, e trabalhe pelo lado sul.
  • Linhas retas (breves perdas de rastreamento): deixe a iluminação uniforme e difusa, elimine os pontos pretos (sombras) na verificação de iluminação, evite os pontos vermelhos (reflexos) e feche outros programas.
  • O ensaio não termina no buraco de fuga: só termina sozinho se ‘Auto-end on escape hole’ estiver ligado; senão, clique em ‘END’ quando o animal entrar totalmente no buraco.
Mais detalhes

Os trajetos não são suavizados artificialmente, então trajetos irregulares refletem movimentos bruscos. Um animal pode investigar um buraco sem entrar, por isso muitos usuários deixam ‘Auto-end on escape hole’ em ‘No’ e encerram o ensaio eles mesmos. Ajuste a faixa de tigmotaxia para que os buracos fiquem dentro dela antes de ler aproximações e erros.

Barnes (1979) testou ratos numa plataforma circular que favorecia o uso de pistas espaciais para a solução, e viu que a intensidade do reforço sináptico se correlacionava estatisticamente com a capacidade de realizar a tarefa da plataforma circular.

Lendo resultados de campo aberto e de testes com objetos

No campo aberto, ficar junto às paredes (tigmotaxia) e o tempo nas zonas externas são as medidas usuais ligadas à ansiedade; leia-as junto com o comprimento do trajeto e a velocidade para não confundir mudanças de atividade com ansiedade.

Padrão típico dos controles
Quando camundongos são colocados num campo aberto, exploram sobretudo a zona periférica, e essa tendência de ficar perto das paredes diminui aos poucos nos primeiros minutos de exploração (Simon et al., 1994).
Sinais de déficit
Perfil do tipo ansiogênico: fármacos ansiogênicos de referência aumentaram a tigmotaxia em camundongos (Simon et al., 1994). Mais inatividade ou congelamento também pode refletir fadiga, estresse ou ansiedade, efeitos farmacológicos ou déficit motor, então confira também a velocidade e o comprimento do trajeto.
Sinais de memória forte
Perfil do tipo ansiolítico: fármacos ansiolíticos reduziram a tigmotaxia em camundongos (Simon et al., 1994), e em ratos a tigmotaxia foi suprimida por agentes ansiolíticos (Treit e Fundytus, 1988).

Problemas de montagem que parecem resultados

  • A cruz salta numa área: ajuste o limiar com o animal nessa área.
  • A cruz segue a cauda ou as fezes: mova ‘Set X-Y Size’ para a direita para animais grandes em caixas pequenas.
  • Cor de cruz errada: uma cruz verde rastreia animais escuros em fundo claro e uma vermelha animais brancos em fundo escuro; recalibre com a configuração correta de cor de fundo.
  • Objetos ou vãos entre arenas são rastreados: todo o fundo deve ser de uma única cor contrastante, e os objetos devem combinar com o piso ou ser mascarados.
Mais detalhes

Médias do ensaio inteiro podem esconder efeitos como o interesse inicial por um objeto novo, então use intervalos de tempo. Nos testes com objetos, o rastreamento do centro do corpo pontua o tempo perto dos objetos, enquanto cheiradas e toques com as patas são pontuados manualmente. Para totais interno versus externo, some no Excel as colunas de zona correspondentes. O campo aberto é um modelo animal muito popular de comportamento do tipo ansioso (Prut e Belzung, 2003).

Prut e Belzung (2003) observam que alguns compostos com outro espectro de eficácia terapêutica foram pouco eficazes como ansiolíticos no teste de campo aberto, o que sugere que esse paradigma talvez não modele aspectos dos transtornos de ansiedade. Treit e Fundytus (1988) removeram a atividade geral por análise de covariância. Não damos aqui um padrão de preferência para o reconhecimento de objeto novo; interprete a preferência por objetos com o método e os critérios do protocolo que você seguiu.

Lendo resultados de labirintos de vários braços (EPM, radial, em T e em Y)

Para o labirinto em cruz elevado, compare % de tempo e entradas nos braços abertos versus fechados; para os labirintos radial, em T e em Y, veja a sequência de entradas e as entradas repetidas.

Padrão típico dos controles
Labirinto em cruz elevado: os ratos entraram significativamente menos nos braços abertos que nos fechados e passaram significativamente menos tempo neles (Pellow et al., 1985). Labirinto radial: os ratos foram eficientes, escolhendo em média mais de sete braços diferentes nas primeiras oito escolhas (Olton e Samuelson, 1976). Labirinto em T: no segundo de dois ensaios rápidos, o roedor tende a escolher o braço não visitado antes (Deacon e Rawlins, 2006).
Sinais de déficit
Labirinto em cruz elevado, perfil do tipo ansiogênico: compostos que causam ansiedade no ser humano reduziram significativamente a porcentagem de entradas nos braços abertos e o tempo neles (Pellow et al., 1985). Labirinto em T: tanto a alternância espontânea quanto a recompensada são muito sensíveis à disfunção do hipocampo (Deacon e Rawlins, 2006).
Sinais de memória forte
Labirinto em cruz elevado, perfil do tipo ansiolítico: um aumento da atividade nos braços abertos (duração e/ou entradas) reflete comportamento ansiolítico (Walf e Frye, 2007).

Problemas de montagem que parecem resultados

  • Não há cruz de rastreamento: confira a configuração de cor de fundo na calibração, depois ponha Size logo acima de zero e varra o limiar devagar.
  • Um ensaio de 0,1 s indica um mouse que dá clique duplo; tente outro.
  • A contagem de entradas parece errada: confira a Detection Area; em 100% qualquer entrada conta, em 25% só entradas nos 25% mais distantes do braço.
Mais detalhes

O HVS Image lista os dados por braço a partir do braço mais à esquerda, em sentido horário, e para o labirinto em cruz elevado informa % de tempo e entradas em abertos versus fechados. Dá para reanalisar com outras porcentagens de Detection Area a qualquer momento, então informe a que você usou. Nem a novidade nem a iluminação contribuíram significativamente para o comportamento dos ratos no labirinto em cruz (Pellow et al., 1985).

No labirinto radial houve um efeito de recência pequeno mas confiável: a chance de erro de repetição aumentava com o número de escolhas desde a primeira vez (Olton e Samuelson, 1976). Pellow et al. (1985) viram que nem antidepressivos nem tranquilizantes maiores tinham efeito específico no labirinto em cruz.

Lendo resultados de nado forçado

O HVS Image dá a % de tempo escalando, mergulhando, nadando e flutuando, além de velocidade e trajeto. Confira a faixa de rastreamento e o rastreamento da cauda antes de interpretar as porcentagens.

Padrão típico dos controles
Ainda não há padrão publicado confirmado para este teste, então compare com seu próprio grupo controle.
Sinais de déficit
Ainda não há padrão publicado confirmado para este teste, então compare com seu próprio grupo controle.
Sinais de memória forte
Ainda não há padrão publicado confirmado para este teste, então compare com seu próprio grupo controle.

Problemas de montagem que parecem resultados

  • A cruz salta para uma cauda erguida ou gotas de água na parede do recipiente: mova ‘Set X-Y Size’ para a direita.
  • Escalar, nadar e mergulhar parecem mal classificados: confira a altura da faixa de rastreamento, para que o ponto mais alto do animal fique no terço superior ao escalar, no do meio ao nadar ou flutuar e no inferior ao mergulhar.
  • A cruz não fica no animal em nenhuma posição do controle deslizante: melhore a iluminação e as configurações da câmera para um fundo uniforme, bom contraste e sem reflexos.
Mais detalhes

O software usa a parte mais alta do animal dentro da área de rastreamento para classificar escalar, nadar/flutuar e mergulhar, e separa nadar de flutuar pela velocidade. Com três recipientes rodados como uma grade 3 x 3, só os arquivos dos recipientes reais são seus dados.

Ainda não há artigo de nado forçado na base de publicações verificadas (uma referência clássica foi proposta e aguarda aprovação), então não damos aqui padrão controle, de déficit ou aprimorado.

Lendo resultados do labirinto aquático no HVS 6D VR

Os ensaios de RV são analisados como o labirinto aquático, então valem as mesmas medidas e cuidados. Valores de RV de roedores e humanos não devem ser comparados diretamente.

Padrão típico dos controles
Ainda não há padrão controle verificado específico de RV, então leia os resultados como no labirinto aquático: medidas de quadrante só fazem sentido quando os alvos ficam no centro dos quadrantes; caso contrário, use encontros próximos e proximidade de Gallagher.
Sinais de déficit
Quando pessoas precisam usar pistas espaciais para chegar a uma plataforma de fuga escondida, pacientes com ressecções do hipocampo mostram déficits graves de navegação espacial em relação a controles da mesma idade (Astur et al., 2002).
Sinais de memória forte
Ainda não há padrão publicado confirmado para este teste, então compare com seu próprio grupo controle.

Problemas de montagem que parecem resultados

  • O movimento continua depois que o participante para: encurte SMOOTH_MOTION; se pequenas vibrações ou sons movem o participante, baixe um pouco OMNI_SENS.
  • Passos leves não são detectados: aumente OMNI_SENS.
Mais detalhes

A análise de RV mostra só a posição de plataforma usada no ensaio. Os testes de sonda vão até o tempo máximo mesmo quando o alvo é alcançado, então mantenha a posição aprendida em TARGET_POSITION para que apareça nos traçados e seja analisada. O HVS 6D VR não registra a ajuda do experimentador, então anote qualquer ajuda dada.

Astur et al. (1998) viram de forma consistente que os homens chegavam à plataforma escondida melhor que as mulheres em várias medidas. Thornberry et al. (2021) apontam inconsistência no uso do labirinto aquático virtual, sobretudo no ambiente e nos procedimentos, então descreva seu ambiente e suas pistas por completo.

Uma forma de ver como a memória muda durante uma sonda é a análise por intervalos de tempo de Devan-Baker.

Fontes

  1. Maei (2009). What is the most sensitive measure of water maze probe test performance?. Frontiers in Integrative Neuroscience 3. doi:10.3389/neuro.07.004.2009
  2. Blokland et al. (2004). A detailed analysis of rats’ spatial memory in a probe trial of a Morris task. Behavioural Brain Research 154(1):71-75. doi:10.1016/j.bbr.2004.01.022
  3. Gallagher et al. (1993). Severity of spatial learning impairment in aging: Development of a learning index for performance in the Morris water maze. Behavioral Neuroscience 107(4):618-626. doi:10.1037/0735-7044.107.4.618

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